對(duì)于耐藥細(xì)胞株的培養(yǎng)方法你了解多少？

　　耐藥細(xì)胞株在長(zhǎng)期保存和傳代過(guò)程中受到各種不穩(wěn)定因素的影響，例如，細(xì)胞遺傳污染和基因變異。因此，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，細(xì)胞的遺傳物質(zhì)可能發(fā)生變化，導(dǎo)致其生物學(xué)特性發(fā)生變化，從而降低動(dòng)物模型的一致性和可比性。因此，為了保證動(dòng)物模型的穩(wěn)定性，必須對(duì)細(xì)胞株的質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。那么你對(duì)它的培養(yǎng)方法了解多少？

　　所有轉(zhuǎn)染腫瘤和病毒的細(xì)胞都被認(rèn)為具有潛在的生物危害，必須在二級(jí)生物安全平臺(tái)上操作，請(qǐng)注意防護(hù)。所有與該單元接觸的廢液和容器只能在高壓滅菌后丟棄。收到耐藥細(xì)胞株后，用倒置透鏡觀察整個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。

 

　　1、若細(xì)胞未滿，用75%酒精噴整瓶消毒，放入超級(jí)菌臺(tái)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)基，繼續(xù)換10ml新鮮培養(yǎng)基后培養(yǎng)。

　　2、如果細(xì)胞滿了，可以傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

　　（1）棄去培養(yǎng)基，用PBS（不包括鈣和鎂離子）洗滌1-2次。

　　（2）在培養(yǎng)瓶中加入1ml消化液，倒置在37℃培養(yǎng)箱中預(yù)熱1-3分鐘，然后將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)10-30秒，觀察倒置顯微鏡下的細(xì)胞消化。如果大部分細(xì)胞變成圓形，迅速收回控制臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶，然后加入少量*培養(yǎng)基終止消化。

　　（3）按6-8ml/瓶加入*培養(yǎng)基，輕輕打勻，吸出一半，分裝到新的培養(yǎng)瓶中。除非另有說(shuō)明，接受細(xì)胞后的繼代培養(yǎng)一般為一到二。

　　耐藥細(xì)胞株的培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

　　1、細(xì)胞在低倍鏡（4倍或5倍物鏡）下觀察，否則無(wú)法準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。要查看細(xì)胞的形態(tài)，請(qǐng)使用10x或20x物鏡。

　　2、瓶?jī)?nèi)運(yùn)輸介質(zhì)不可重復(fù)使用。請(qǐng)使用具有雙抗體的新培養(yǎng)基。細(xì)胞冷凍后，培養(yǎng)基不得添加任何抗生素。

　　3、有些細(xì)胞沒(méi)有牢固地貼在墻上。如果發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞脫落，可以離心吹干后接種到新瓶中。